特异性脂酶染色

特异性酯酶又称粒细胞酯酶，主要分布在粒细胞和肥大细胞内。原粒细胞为阴性或弱阳性反应，早幼粒细胞和中幼粒细胞呈强阳性反应，分叶核粒细胞酶活性减弱。嗜酸性粒细胞呈阴性，嗜碱性粒细胞、单核细胞和肥大细胞呈阴性或弱阳性反应。巨核细胞、血小板、浆细胞、红系细胞及淋细胞呈阴性。 　本染色法主要用于鉴别急性白血病类型。急性粒细胞白血病时，原粒细胞和幼稚粒细胞均呈一定程度阳性，成熟粒细胞酶活性下降。急性单核细胞白血病和急性淋巴细胞白血病时呈阴性。急性粒-单核细胞白血病时，部分白血病细胞(原粒和早幼粒细胞)呈阳性，有些白血病细胞(原单核和幼单核细胞)呈阴性。

（1）DAB染色步骤：干燥骨髓（血）片用戊二醛-甲醛固定液固定2min，生理盐水漂洗后保存于盐水内直至下一步染色止。置基质液中孵育3min，0.05mol/LTris-HCl（pH7.3～7.6）快速漂洗3次，置5.0g/L，硝酸铜液内2min，生理盐水漂洗，干后直接镜检或经复染后镜检。

（2）改良巴氏复染步骤：

①DAB染色完毕后标本仍保存于生理盐水中，直至下步染色开始。

②在苏木精染液内染1min，取出后水洗。

③浸入稀盐酸乙醇液内0.5min，水洗2min。

④稀碳酸锂内1min，水洗2min。

⑤依次在50%、70%、80%、95%乙醇内脱水各0.5min。

⑥在橘黄G6中染1min。

⑦95%乙醇内浸洗2次，每次10s。

⑧在EA50液内染10min。

⑨95%乙醇内浸洗2次，每次3min。

⑩无水乙醇内浸洗2次，每次1min。

　　染色温度以38～39℃，此时酶反应强而无明显扩散，并且萘酚和坚牢紫酱GBC较低温时易溶解。